鱼类胰岛素样生长因子1(IGF

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目录

第一章 引言

1．IGF研究历史及IGF信号途径介绍

1．1 IGF-1的发现

1．2 IGF信号通路的组成

1．3 IGF配体

1．4 受体IR和IGF-R

1．5 IGF结合蛋白

1．6 GH-IGF内分泌生长调控轴

1．7 IGF-1的合成和体内循环

2．IGF-1的功能研究

2．1 IGF1-1对生长影响的研究

2．2 IGF-1对肌肉增殖的影响

2．3 IGF-1对代谢的影响

2．4 IGF-1对生殖的影响

2．5 IGF-1对衰老的影响

2．6 IGF-1的其他功能及临床应用

3．硬骨鱼类IGF信号途径

3．1 斑马鱼IGF信号途径的组成及序列分析

3．2 鱼类IGF-1系统功能总结

4．鲫鱼作为研究材料的优点

第二章 材料和方法

1．主要仪器与设备

2．主要试剂和试剂盒

2．1 培养基和常用试剂及其配制

2．2 主要分子生物学试剂

2．3 蛋白实验试剂及抗体

2．4 试剂盒

3．实验材料

3．1 载体及菌株

3．2 实验用鱼的养殖和管理

4．主要实验技术和方法

4．1 感受态细胞制备

4．2 基因组提取

4．3 总RNA提取(Trizol法)

4．4 cDNA合成

4．5 PCR产物胶回收

4．6 RNA探针制备

4．7 整体原位杂交(Whole Mount In Situ Hybridization)

4．8 组织切片及苏木精-伊红(HE)染色

4．9 免疫组织化学和免疫荧光技术

4．10 总蛋白提取及蛋白浓度测定

4．11 蛋白电泳及蛋白印迹检测

4．12 转录组测序

5．实验过程

5．1 IGF-1转基因载体的构建

5．2 显微注射及表型观察

5．3 转基因鱼筛选

5．4 生长指标评估以及肌肉组织的病理切片分析

5．5 组织切片及免疫组化

5．6 转录组分析

5．7 蛋白质免疫印迹检测

5．8 实时定量荧光PCR

5．9 基础代谢实验

5．10 肌肉组织中氨基酸含量检测

5．11 肌肉组织中脂肪及ATP含量

5．12 其他组织切片及观察

第三章 实验结果及分析

1．斑马鱼FO高表达IGF-1的表型

2．转基因鲫鱼的获得与表型

3．转基因鲫鱼组织病理与相关分析

3．1 组织病理切片分析

3．2 肌肉组织免疫组织化学

3．3 转录组结果分析

3．4 实时荧光定量PCR

3．5 蛋白印迹杂交

3．6 基础代谢实验

3．7 肌肉组织中游离氨基酸(BCAAs)检测

3．8 肌肉组织中的脂肪及ATP检测

3．9 IGF-1高表达对生殖系统的影响

第四章 讨论

参考文献

附录

声明

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