柚皮提取物的降血脂和抑肿瘤作用

柚皮提取物的降血脂和抑肿瘤作用张海德１，何继芹１，杨晓泉２（１．华南热带农业大学工学院，海南　儋州 ５７１７３７；２．华南理工大学轻工与食品学院，广东　广州 ５１０６４０）摘 要：目的：探讨柚皮提取物的生物活性。

方法：采用动物试验研究了柚皮抗氧化物质的降血脂和抑肿瘤作用。

结果：与高脂组相比，样品组能显著降低昆明种小白鼠血清胆固醇（ＴＣ）、血清甘油三酯（ＴＧ）和低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）的浓度，并相对升高高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）的浓度（ｐ＜０．０５）。

试验发现柚皮提取液对Ｓ１８０肉瘤具有抑制作用，抑瘤率为２９．７％，与正常对照组比较，肿瘤对照组小鼠的胸腺明显缩小，平均湿重指数为１．２１±０．４３ｍｇ／ｋｇ，明显低于正常对照组（２．６４±０．８２ｍｇ／ｋｇ）　（ｐ＜０．０１）。

而样品组小鼠胸腺指数（１．９６±０．５４ｍｇ／ｋｇ）　明显高于肿瘤对照组（ｐ＜０．０５）。

结论：在一定的剂量下，柚皮提取液能降低高脂昆明种小白鼠血脂；对荷Ｓ１８０小鼠的肿瘤生长有抑制作用，并且能增强机体的免疫功能。

关键词：柚；提取物；降血脂；抑肿瘤Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｌｉｐｅｍｉｃ　Ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ Ｐｕｍｍｅｌｏ　（Ｃｉｔｒｕｓ　ｇｒａｎｄｉｓ　Ｌ．　Ｏｓｂｅｃｋ）　Ｐｅｅｌ　ＥｘｔｒａｃｔＺＨＡＮＧ　Ｈａｉ－ｄｅ１，ＨＥ　Ｊｉ－ｑｉｎ１，ＹＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｑｕａｎ２（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，　Ｄｉａｎｚｈｏｕ ５７１７３７，　Ｃｈｉｎａ；２．　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｇｈｔ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４０，　Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：　Ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｐｕｍｍｅｌｏ　ｐｅｅｌ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ：　Ｔｈｅ　ａｎｔｉｌｉｐｅｍｉｃ　ａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒｃａｐａｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ：　Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｈａｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆｔｏｔａｌ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　（ＴＣ），　ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　（ＴＧ），　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　（ＬＤＬ－Ｃ）　（ｐ＜０．０５），　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　（ＨＤＬ－Ｃ）　（ｐ＜０．０５）　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｌｉｐｉｄ　ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．　Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　Ｓ１８０　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎ　ｓａｍｐｌｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　２９．７％．　Ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｗｅｔ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｈｙｍｕｓ　ｇｌａｎｄ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐｗａｓ　１．２１±０．４３ｍｇ／ｋｇ，　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　２．６４±０．８２ｍｇ／ｋｇ　（ｐ＜０．０１），　ａｎｄｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｗｅｔ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｈｙｍｕｓ　ｇｌａｎｄ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　１．９６±０．５４ｍｇ／ｋｇ，　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ　（ｐ＜０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｃｏｕｌｄ　ｄｅｃｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｌｉｐｅｍｉａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｈｉｔｅ　Ｋｕｎｍｉｎｇ　ｍｉｃｅ，　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈｏｆ　ｔｕｍｏｒ　Ｓ１８０　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ．Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｕｍｍｅｌｏ；ｅｘｔｒａｃｔ；ａｎｔｉｌｉｐｅｍｉｃ；ａｎｔｉｔｕｍｏｒ中图分类号：Ｑ９４６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００２－６６３０（２００５）增刊－００７３－０４收稿日期：２００５－０７－１５作者简介：张海德（１９７０－），男，副教授，博士，研究方向为农产品深加工、天然产物化学。

天然抗氧化剂很受大众的欢迎，从植物产品中提取具有功能性的天然抗氧化物质，是国际上天然产物研究热点之一，也是农产品精深加工重要内容之一，能有效地提升农产品附加值。

近年来的调查资料表明，心脑血管疾病是除癌症之外的另一严重危害人类健康的疾病，而高血脂是其最重要的病因，特别是血浆中总胆固醇水平与这类病关系尤为密切。

为了预防和治疗高血脂症，科学工作者不断寻找降脂药物和利用某些食物或食物成分来达到降低血脂的目的。

柚（Ｃｉｔｒｕｓ　ｇｒａｎｄｉｓ　Ｌ．　ｏｓｂｅｃｋ）属芸香科常绿乔木，原产东南亚，我国长江以南各省有栽培。

近年来的研究表明［１，２］，芸香科柑橘属的橘、橙和柚等水果中富含天然抗氧化物质，并被分离鉴定为黄酮化合物等，这些水果也是人类主要的膳食黄酮来源之一［３］。

黄酮化合物具有多种生理活性功能，研究较多的是其抗氧化活性［４，５］、清除自由基作用［６，７］、降血脂作用［８，９］和抗肿瘤作用［１０，１１］等。

本文对从柚皮中提取分离出含黄酮化合物的组分Ｃ３，进行了其降血脂和抑肿瘤作用的研究。

１材料与方法１．１样品取沙田柚（Ｃｉｔｒｕｓ　ｇｒａｎｄｉｓ　Ｌ．　Ｏｓｂｅｃｋ　ｖａｒ．　Ｓｈａｔｉａｎｙｏｕ，　购于广州市农贸市场）的外果皮，破碎成１～４ｍｍ的粒度后，用７０％乙醇溶液在５０℃下的摇床上密封、振动浸取４ｈ，过滤，滤液经旋转蒸发仪真空浓缩（Ｔ＜５０℃）后，上聚酰胺柱层析分离，用水－甲醇梯度洗脱，得到抗氧化活性较强的组分Ｃ３，真空浓缩（Ｔ＜５０℃）后，测得其总黄酮含量为６５．５％。

１．２仪器ＳＨＺ－８８台式水浴恒温振荡器 江苏太仓市实验设备厂；Ｍｏｄｅｌ－３　旋转蒸发仪 上海医械专机厂；ＨＬ－５恒流泵 上海沪西分析仪器厂；ＸＷＴ－Ｓ小型台式记录仪 上海自动化仪表三厂；ＨＤ－１核酸蛋白检测仪 上海沪西分析仪器厂；７１７０Ａ全自动生化检测仪 日本（日立公司）；ＴＧＬ－１Ｇ高速台式离心机 上海医用分析仪器厂；ＪＡ２００３电子天平 上海民桥电子仪器有限公司。

１．３方法１．３．１柚皮提取物的降血脂作用１．３．１．１实验动物小白鼠（昆明种）３０只，购于广州新市石马实验动物场，体重２５～３０ｇ，雌雄不拘。

实验期间每日按动物体重的２／１０给食，自由饮水。

１．３．１．２检测项目血浆的血清胆固醇（ＴＣ），血浆低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ），血浆高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ），甘油三酯（ＴＧ），载脂蛋白Ａ１，载脂蛋白Ｂ。

１．３．１．３实验方法将动物随机分组，每组１０只老鼠。

（Ａ）　正常对照组；（Ｂ）　高脂对照组，每日灌胃生理盐水一次；（Ｃ）　样品组，每日灌胃样品液一次。

剂量为０．５ｍｌ／２０ｇ　ｂｗ・ｄ，连续７ｄ，于末次给药后２ｈ，除正常对照组腹腔注射生理盐水（０．５ｍｌ／只）外，各组动物均以小鼠高胆固醇血症快速造型法，一次腹腔注射７５％蛋黄乳（０．５ｍｌ／只），２０ｈ后，所有动物股静脉取血，静置，分离血清，然后，在全自动生化检测仪上测定ＴＣ、ＨＤＬ－Ｃ、ＬＤＬ－Ｃ等的值。

１．３．２柚皮提取物的抑Ｓ１８０瘤作用１．３．２．１动物及分组昆明种小鼠（３０只），购于广州新市石马实验动物场，体重２５～３０ｇ，小鼠随机分成正常对照组（１０只老鼠）和肿瘤组（２０只），肿瘤组动物于接种后再随机分成肿瘤对照组（１０只）和样品组（１０只）。

实验期间，动物自由饮水及摄食，饲料为正常动物生长、繁殖用的饲料。

１．３．２．２瘤株及接种Ｓ１８０瘤，购于中山医科大学实验动物中心，常规于鼠腹腔内接种传代。

实验接种时无菌抽出小鼠腹腔内传代５～６ｄ的腹水，生理盐水１：５稀释混匀，接种于小鼠左前腋窝下，每鼠０．２ｍｌ（约１０５个细胞）。

４ｄ后小鼠腹部隆起，腹腔内已有腹水，以后腹水逐渐增多，表明小鼠已荷瘤。

１．３．２．３实验方法动物接种肿瘤后第２ｄ，每天按时腹腔注射０．１ｍｌ样品液二次，持续７ｄ，正常对照组与肿瘤对照组注射等量的生理盐水。

实验中，各组可能会有个别动物因注射或其它原因死亡而淘汰。

实验的第８ｄ，小鼠脱颈处死，解剖小鼠，完整取出肿瘤、胸腺及脾脏，称重。

计算胸腺指数和脾脏指数。

所得结果以下列方式表示：脏器湿重（ｍｇ）脏器指数（ｍｇ／ｋｇ）＝————————…… （１）小鼠体重（ｋｇ）计算抑瘤率。

所得结果以下列方式表示：肿瘤抑制率对照组平均瘤重－给药组平均瘤重—————————————————×１００％ （２）对照组平均瘤重１．４统计学分析采用Ｏｒｉｇｉｎ　６．１软件对数据进行Ｆ检验和ｔ检验。

２结果与分析２．１样品制备把柚皮的乙醇浸取液，浓缩后用聚酰胺柱层析分离。

聚酰胺活化后，湿法装柱，用水－甲醇溶液梯度洗脱。

得到四个组分，按洗脱顺序分别命名为Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３和Ｃ４，如图１所示。

从图１中可看出，四种组分能较好地分开。

聚酰胺柱层析收集到的四种组分的抗氧化活性用亚油酸－硫氰酸铁法作了比较，以对照组的抑制百分率为０％计，结果如图２所示。

这些结果表明，组分Ｃ３是所有组分中抗氧化活性最强的。

本研究把组分Ｃ３的浓缩物作为试验样品。

２．２柚皮提取物的降血脂作用实验动物血清测定项目如表１所示。

数据采用Ｏｒｉｇｉｎ　６．１软件在计算机上处理，多组平均数之间差异显著性用单因素试验的方差分析进行Ｆ检验，组间平均数差异显著性用ｔ检验分析。

总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和高密度脂蛋白（ＨＤＬ）等四项指标的多组平均数之间的方差分析的Ｆ检验表明，它们都存在显著差异（ｐ＜０．０５）。

组间平均数差异显著性用ｔ检验得知，正常对照组与高脂对照组有显著差异（ｐ＜０．０５），这表明，高脂对照组造脂成功。

样品组与高脂对照组间存在显著差异（ｐ＜０．０５），说明样品能有效地对小白鼠的血脂起作用。

试验结果表明，在一定的剂量下，柚皮提取液能使血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ－Ｃ的浓度显著下降，并相对提高血清ＨＤＬ－Ｃ的浓度，说明，适量的柚皮提取液对冠心病和动脉粥样硬化可能有一定的防治作用。

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