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细菌生长曲线

来源：泰然健康网时间：2024年12月06日 06:09

细菌生长曲线

以时间为横坐标，以活菌数的对数为纵坐标，可得出一条生长曲线，曲线显示了细菌的生长繁殖的4个时期：迟缓期，对数期，稳定期，衰亡期。 [1]

迟缓期

迟缓期（lag phase）：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少。迟缓期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。生物制药中常通过加入酶激活剂如镁离子等缩短迟缓期。 [1]

对数期

对数期（logarithmic phase）：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。

稳定期

稳定期（stationary phase）：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、H2O2等）积累pH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽胞等。 [1]

衰亡期

衰亡期（decline phase）：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辨认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。

体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 [1]

测定原理

将细菌接种到一只具有侧壁试管的三角烧瓶内的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此三角烧瓶，用"721"分光光度计测定菌浓度（光密度值，OD值），并将所得结果与相对应的培养时间绘制出坐标图，就可获得该菌的生长曲线。此测定法的优点是不改变菌液体积并用同一培养容器的正常生长条件下，连续读取OD值，故不但可测出细菌生长曲线，还可比较同一菌株在不同的培养基和培养条件下的生长规律。 [2]

测定步骤

（1）菌液培养：在菌株的斜面培养物上挑取一环菌苔，接种千肉汤培养基中，3TC静止培养12h左右，此菌液即为种子培养液。 [3]

（2）分装培养液及校正零点：用无菌移液管吸取25mL培养基加至有侧臂试管的三角烧瓶中。将未接种的培养液倾入其侧臂试管中，并在光电比色计上调节零点。即使光电比色计上的OD值在零点上。 [3]

（3）接种及零时测定：用移液吸管吸取2.SmL种子培养液接种瓶中，并充分摇匀。将刚接种的培养液倾入侧臂试管中，测定光电比色计OD值。此时的读数为接种后菌种生长曲线中的零时读数值（即接种拭）。

（4）培养及生长量测定将零时测定后的三角烧瓶立即放入恒温水浴摇床上震荡培养，培养温度为3TC，摇床的频率为100次/min 左右（温度和频率可随时调节）。在培养中，应每隔30min从摇床上取下三角烧瓶，将菌液倾入侧臂试管中，并在光电比色计上读取OD值。记录每次所测得的数据。在每次测定时，均要用空白对照管的培养液来校正光电比色计的零点。

（5）绘制生长曲线：以测定的时间为横坐标，菌数的对数（OD值）为纵坐标，在半对数坐标纸上描点绘图，所得的曲线即为被测荫在实验条件下的生长曲线。 [2]